Рис. 10. По оси ординат - снижение стимулирующего эффекта пептидов и изопротеренола на АЦ (принятого за 100%) в присутствии тирфостина 47
Рис. 11. По оси ординат - снижение стимулирующего эффекта пептидов и изопротеренола на АЦ (принятого за 100%) в присутствии генистеина
Рис. 12. По оси ординат - снижение стимулирующего эффекта инсулина и изопротеренола на АЦ (принятого за 100%) в присутствии тирфостина 47
Рис. 13. По оси ординат - снижение стимулирующего эффекта пептидов и серотонина на АЦ (принятого за 100%)
Рис. 14. По оси абсцисс - концентрация генистеина в мкМ; по оси ординат - снижение АЦ стимулирующего эффекта пептидов и серотонина (принятого за 100%) в присутствии генистеина
У моллюсков наиболее выраженное снижение АЦ стимулирующего эффекта пептидов наблюдалось в присутствии тирфостина 47 (2.5 мкМ). Эффект инсулина уменьшался до 20%, эффект ЭФР до 30-35%. (Рис. 13). В присутствии генистеина АЦ стимулирующий эффект пептидов снижался до 25% в случае инсулина (1.25 мкМ генистеин), и до 50-75% в случае ЭФР (5 мкМ генистеин) (рис. 14).
Необходимо подчеркнуть, что у моллюсков A.cygnea активность АЦ увеличивается не в присутствии изопротеренола, а в присутствии серотонина, реализующего свое действие также через рецепторы серпантинного типа (Pertseva et al., 1992). Исследование действия ингибиторов тирозинкиназ - тирфостина 47 и генистеина (0.5-20.0 мкМ) на стимулирующий АЦ эффект серотонина в мембранной фракции мышечных тканей моллюсков не выявило изменений в действии этого биогенного амина на активность АЦ.
Таким образом, в мембранной фракции крыс, моллюсков и культуры клеток куриных миобластов стимулирующее влияние исследуемых пептидов на АЦ снижалось в присутствии тирфостина 47 и генистеина в диапазоне концентраций - 1.25, 2.5, 5.0, 10, 20 мкМ во всех исследуемых объектах (Рис. 10-14).
Стимулирующее действие изопротеренола (крысы, куры) или серотонина (моллюски) на АЦ, реализуемое через рецепторы серпантинного типа не изменялись в присутствии тирфостина 47 или генистеина в исследуемых объектах (см. Рис. 10-14).
Можно заключить, что в мышечной ткани млекопитающих (крысы), птиц (куры), культуре клеток куриных миобластов и в мышцах моллюсков активирующее действие инсулина, ИФР-1, ЭФР на АЦ осуществляется с участием рецепторов тирозинкиназного типа, специфичных для действия этих пептидов. (Pertseva et al., 1996; Plesneva et al., 2003).
Участие G-белков в реализации АЦ стимулирующего эффекта инсулина
Для доказательства участия G-белков в действии инсулина на активность АЦ был применен широко распространенный подход, в котором используется набор гуаниновых нуклеотидов, способных в разной степени либо стимулировать ГТФ-азную активность G-белков в присутствии ГТФ и его аналогов - ГТФ?S, ГИДФ и тем самым активировать АЦ, либо ингибировать ГТФ-азную активность G-белка в присутствии ГДФ?S.
Было исследовано влияние ГТФ и ряда его негидролизуемых аналогов на активность АЦ в присутствии и отсутствии гормона (Табл. 6).
Таблица 6. Влияние гуаниновых нуклеотидов в отсутствии и присутствии инсулина на активность АЦ во фракции мышечных мембран крысы и моллюска
Воздействия
Животные
Крыса
Моллюск
Активность АЦ (%)
Контроль
100±1.01%
100±1.3%
Инсулин (10-8М)
222±1.3%
(+122%)
186±1.8%
(+86%)
ГТФ?S (10-5М)
242±1.4%
(+142%)
470±9.4%
(+370%)
ГИДФ (10-5М)
236±1.8%
(+136%)
269±4.9%
(+169%)
ГТФ (10-5М)
135±1.05%
(+35%)
163±5.1%
(+63%)
ГДФ?S (10-5М)
95±1.2%
(-5%)
92±2.4%
(-8%)
Инсулин + ГТФ?S
473±2.5%
(+373%)
[109%]
726±20.3%
(+626%)
[170%]
Инсулин + ГИДФ
399±8.2%
(+299%)
[41%]
441±12.3%
(+341%)
[86%]
Инсулин + ГТФ
277±10.1%
(+177%)
[20%]
279±8.4%
(+179%)
[30%]
Инсулин + ГДФ?S
102±5.4%
(+2%)
[-17%]
105±4.3%
(+5%)
[-86%]
Примечание: в круглых скобках - активирующий АЦ эффект используемых агентов в% по отношению к базальной активности, принятой за 100%. В квадратных скобках - потенцирование эффекта гормона в присутствии гуаниновых нуклеотидов в %.
Согласно представленным данным, ГТФ?S, ГИДФ, ГТФ стимулируют активность АЦ в мышечных мембранах крыс и моллюсков. При совместном действии инсулина и гуаниновых нуклеотидов происходит усиление (потенцирование) эффекта гормона по сравнению с аддитивным эффектом гормона и гуаниновых нуклеотидов, действующих раздельно - в присутствии ГТФ?S, ГИДФ и ГТФ на +109%, +41% и +20% у крыс и на +170%, 86% и 30% у моллюсков (табл. 6). ГДФ?S же напротив снижает АЦ стимулирующий эффект инсулина как в мышцах крыс, так и моллюсков.
Потенцирование эффекта инсулина в присутствии ГТФ?S, ГИДФ, ГТФ и отсутствие потенцирующего эффекта в присутствии ГДФ?S свидетельствует о вовлеченности Gs-белков в АЦ сигнальный механизм действия пептидов инсулинового суперсемейства.
Таблица 7. Влияние коклюшного и холерного токсинов на базальную, инсулин- и ИФР1-стимулируемую активность АЦ в скелетных мышцах крысы и моллюска A.cygnea
Активность АЦ (пкмоль цАМФ/мин/мг белка)
Скелетные мышцы крысы
Гладкие мышцы моллюска
Без КТ
+КТ
Без пептидов
39.7±3.4
48.5±2.0
63.2±4.1
69.1±9,6
(100%)
Инсулин
67.9±3.6
48.2±2.7
200.5±14.4
74.2±7.6
10-9М
(171%)
(99%)
(317%)
(108%)
ИФР-1
57.4±2.1
43.1±1.6
139.2±12.4
76.8±7.3
(145%)
(89%)
(220%)
(111%)
Без ХТ
+ХТ
39.6±2.6
79.7±2.7
47.4±3.0
94.3±5.6
69.3±2.8
105.8±7.4
151.7±9.8
134.0±7.5
(175%)
(133%)
(320%)
(142%)
56.7±4.2
106.2±6.5
100.0±5.4
122.6±8.8
(143%)
(210%)
(130%)
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8