Контролем служит смесь культуры лептоспир с физиологическим раствором по 0,1 мл. Лептоспиры в контроле должны оставаться подвижными, не иметь признаков лизиса и агглютинации.
4.1.8. Реакцию учитывают путем микроскопии капель из каждой лунки в темном поле микроскопа при увеличении 20X10 или 20X7X1,5. Капли из лунок выносят на предметное стекло бактериологической петлей от большего разведения к меньшему и просматривают их без покровного стекла. Капли можно наносить двумя способами: 1) бактериологической петлей диаметром 3 мм наносят на стекло сразу до 30 капель и затем просматривают их под микроскопом; 2) бактериологической петлей диаметром 1 мм наносят на предметное стекло в освещенный центр поля зрения одну каплю и просматривают ее, передвигают столик на 2-3 мм и рядом с первой наносят и учитывают вторую каплю. В этом случае на одном предметном стекле учитывают 60-80 капель.
После каждого антигена петлю прокаливают и охлаждают.
4.1.9. Результаты реакции оценивают в крестах по четырехбалльной системе:
+ + + +агглютинированы 100% лептоспир;
+ + + - агглютинированы 75% лептоспир;
+ + - - агглютинированы 50% лептоспир;
+ - - - агглютинированы 25% лептоспир;
- (знак минус) агглютинация отсутствует. Агглютинация проявляется в склеивании лептоспир и образовании паучков. Паучок включает от 3-5 до нескольких десятков и даже сотен лептоспир. Свободные концы лептоспир сохраняют подвижность.
В начальных разведениях сыворотки может наблюдаться лизис лептоопир, проявляющийся в набухании и обездвиживании, появлении зернистости и полного распада микробных клеток.
4.1.10. Положительной считают реакцию, оцененную не менее чем на два креста, при отсутствии агглютинации в 'контроле.
При повторном исследовании сыворотки крови реакцию ставят в тех же разведениях.
4.2. Порядок постановки и учета реакции макроагглютинации (РА)
Реакцию макроагглютинации ставят и учитывают в соответствии с Временным наставлением по применению антигенов для диагностики лептоспироза у животных реакцией макроагглютинации, утвержденным Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 12 мая 1974 года.
4.3. Оценка показаний РМА и РА
4.3.1. Животных с титром сыворотки в РМА 1: 100 или реагирующих по РА на 1-2 креста, кроме лошадей и крупного рогатого скота, реагирующих с лептоспирами группы Hebdomadis, считают подозреваемыми в заражении.
Крупный рогатый скот, реагирующий с лептоспирами группы Hebdomadis, и лошадей, реагирующих с лептоспирами любой серологической группы, считают подозреваемыми в заражении при титре антител в РМА 1: 500 или реагирующих в РА на 1-2 креста с неразведенной сывороткой.
Кровь от животных, подозреваемых в заражении, и от животных, не реагировавших при первом исследовании, повторно проверяют через 7-10 дней.
4.3.2. Выявление антител у животных, не реагировавших при первом исследовании, или нарастание титра у реагировавших в РМА в пять и более раз, или положительная РА на 3-4 креста свидетельствуют об активном инфекционном процессе у обследуемых животных.
4.3.3. Животных (кроме лошадей и реагирующего с лептоспирами группы Hebdomadis крупного рогатого скота) с титром сыворотки в РМА 1: 500 и более или в РА на 3-4 креста и крупный рогатый скот, реагирующий с лептоспирами группы Hebdomadis и лошадей, реагирующих с лептоспирами любой серогруппы при титре в РМА 1:2500 и более или в РА на 3-4 креста, рассматривают как возможных лептоспироносителей.
4.3.4. Возбудителями лептоспироза при серологической диагностике считают лептоспир той серологической группы, к которой обнаружены антитела в наиболее высоком титре.
Необходимо учитывать, что в сыворотке крови свиней, крупного рогатого и мелкого рогатого скота и лошадей при исследовании по РМА обнаруживают в 5 - 15% случаев (из числа положительно реагирующих) антитела в наиболее высоком титре к лептоспирам Australis, Autumnalis, Ballum, Pyrogenes, Cynoptery, Bataviae, которые не были выделены ни в одном случае от сельскохозяйственных животных.
Такие реакции следует рассматривать как межгрупповые, являющиеся следствием заражения животных лептоспирами Pomona, Tarassovi и другими, обычно выделяемыми от сельскохозяйственных животных.
Лептоспиры Australis, Bataviae, Autumnalis, Ballum, Pyrogenes, Cynoptery, Kazachstanica могут быть признаны возбудителями лептоспироза у сельскохозяйственных животных только после выделения этих лептоспир в чистой культуре или подтверждении их роли реакцией иммуноабсорбции.
4.4. Методика постановки реакции иммуноабсорбции при исследовании проб сыворотки
4.4.1. В реакции иммуноабсорбции изучают пробы сыворотки животных, агглютинирующие лептоспиры нескольких серологических групп в равно высоких титрах или имеющие наиболее высокий титр - по отношению к лептоспирам, ранее не известным в качестве возбудителя лептоспироза у сельскохозяйственных животных.
4.4.2. Для проведения абсорбции выращивают в 0,2 - 0,5 - литровых флаконах все штаммы лептоспир, с которыми данная проба сыворотки дала реакцию агглютинации. К 5-7-суточным культурам добавляют 0,3% формалина и выдерживают 10-12 часов. Затем лептоспиры осаждают центрифугированием при 10 000 об/мин в течение 30 минут. Сливают надосадочную жидкость, а осадок суспензируют в объеме 0,9 мл среды или физиологического раствора, 0,1 мл исследуемой сыворотки смешивают с 0,9 мл концентрированного антигена и выдерживают в течение 48 часов при температуре 1-5 °С. Абсорбированную сыворотку проверяют в РМА на наличие остаточных антител к штамму-абсорбенту, а затем исследуют с лептоспирами групп, с которыми реагировала сыворотка до абсорбции.
4.4.3. В процессе абсорбции лептоспиры, являющиеся возбудителем инфекции у данной особи, извлекают из сыворотки антитела к лептоспирам всех других серологических групп, в то время как антитела к штамму-возбудителю болезни не абсорбируются из сыворотки гетерологичными типами лептоспир.
Для сокращения объема работы сыворотку можно в начале абсорбировать лептоспирами, являющимися наиболее частыми возбудителями болезни у животных данного вида.
4.4.4. Оценка эпизоотической ситуации в хозяйстве по результатам лабораторных исследований приведена в Инструкции о мероприятиях по борьбе с лептоспирозом животных пп. 2.4., 2.5. и 2.6.
Серологическая группа
Серологический вариант
Типовой штамм
Icterohae-morrhagiae
icterohaemorrhagiae copenhageni mankarso naa'm mwogolo dakota sarmin birkini smithi ndambari ndahambukuje budapest weaveri
RGA M-20 Mankarso Naam Mwogolo Grand River Sarmin Birkin Smith Ndambari Ndahambukuje PV-1 GZ-390-U
Javanica
javanica poi sorex-jalna coxi sofia
Veldrat Batavia 46 Poi Sorex Jalna Cox Sofia 874
Celledoni
celledoni whitcombi
Celledoni Whitcombi
Canicola
canicola bafani kamituga jonsis sumneri broomi bindjei schnueffneri benjamin malaya
Hond Utrecht IV Bafani Kamituga Jones Sumner Patane Bindjei Vleermuise 90-C Benjamin H-6
Ballum
ballum castellonis arboreae
MUS-127 Castellon-3 Arboreae
Pyrogenes
pyrogenes Zanoni myocastoris abramis biggis hamptoni alexi robinsoni rnanilae
Salinem Zanoni LSU-1551 Abraham Biggs Hampton HS-616 Robinson LT-398
Cynopteri
cynopteri canalzoniae butembo
3522-C Cz-188k Butembo
Autumnalis
autumnalis rachmati fortbragg sumatrana bulgarica bangkinang erinaceiauriti mooris sentot louisiana Orleans djasiman gurungi
Akiyama A Rachmat Fort Bragg Sapulette Nikolaevo Bangkinang-1 Erinaceus auritus 670 Moores Sentot LSU-1945 LSU-2580 Djasiman Gurung
Australis
australis lora muenchen jalna bratislava fugis bangkok peruviana pina nicaragua
Ballico Lora Munchen C-90 Jalna Jez Bratislava Fudge Bangkok D-92 Lt-941 LT-932 Lt-990
Pomona
pomona kennewieni monjakov mozdok tropika proechimys
Pomona Lt-1026 Monjakov 5621 CZ-299U LT-796
Grippotypho-sa
grippotyphosa valbuzzi
Moskva-V Valbuzzi
Hebdomadis
hebdomadis nona kambale kremastos worsfoldi jules maru borincana kabura mini
Nebdomadis Nona Kambale Kremastos Worsfold Jules CZ-285- В HS-622 Kabura Sari
szwajizak georgia perameles wolffi
hardjo recreo medanensis trinidad seiroe balcanica polonica nero haemolytica ricardi
Szwajizak LT-117 Bandicoot-343 3705 Hardjoprajitno LT-957 Hond-HC LT-1098 M-84 1627 Burgas 493-Poland Qamsulin March Richardson
Bataviae
bataviae
paidjan djatzi kobbe balboa claytoni brasiliensis
Van Tienen Paidjan HS-26 CZ-320-K LT-761 LT-818 LT-996
Tarassovi
tarassovi bakeri atlantae guidae kisuba bravo atchafalaya chagres rama gatuni
Perepelicin LT-79 LT-81 RP-29 Kisuba Bravo LSU-1013 LT-924 LT-955 LT-839
Panama
panama
CZ-214-K
Sherman!
shermani
LT-821
Semaranga
semaranga patoc sao-paulo
Veldrat Semarang-173 Patoc I Sao Paulo
Andamana
andamana
CH-11
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7