МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ
Харьковский институт усовершенствования врачей
ОДОБРЕНО
Ученым Советом ХИУВ протокол № 6 от 21.06.96 г.
ДИАГНОСТИКА И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ ИНВАЗИИ РОТОВЫХ ПРОСТЕЙШИХ У БОЛЬНЫХ ПАРОДОНТИТОМ
/ Методические рекомендации /
ББК 56.6 Д44
В методических рекомендациях представлены сведения о ап-робированых методах лабораторной диагностики инвазии ротовых простейших у больных пародонтитом, подробно изложена сравни -тельная оценка этих методов. Даны рекомендации о методах спе-цифической протистоцидной терапии при заболеваниях пародонта.
Методические рекомендации предназначены для врачей-сто-матологов, врачей-интернов, слушателей факультетов усовершенст-вования врачей, паразитологов, лаборантов. Могут быть полез-ны инфекционистам, оториноларингологам, микробиологам.
Методические рекомендации составили: профессор В.Ф.Куцевляк; профессор В.А.Никитин; профессор Ю.Л.Волянский; профессор С.В.Бирюкова; к.м.н. Н.Ф.Дзюбан; ассистент Ю.В.Лахтин.
Кафедры терапевтической стоматологии, клинической микробиоло-гии и иммунологии Харьковского института усовершенствования врачей.
Рецензент: профессор Г.Ф.Катурова
15ВМ 966-566-013-6
В полости рта, в частности пародонталышх карманах, у больных пародонтитом встречается два вида протистов: Entamoeba gangivalis - десневая амеба и Trichomonas tenax - ротовая трихомонада. Они обитают и в кариозных полостях зубов, крип-тах миндалин. Многочисленные исследования, посвященные этой проблеме, не позволяют окончательно решить вопрос о роли их в патологическом процессе.
Присутствие ротовых протистов у лиц с интактным пародонтом дают основание авторам отнести их не к паразитам, а к комменсалам. Однако клинические и лабораторные наблюдения показывают, что при разных патологических состояниях изме-няется морфологическая структура десневых амеб, а при инва-зии ротовыми трихомонадами течение заболевания более длительное, затяжное. Особенно тяжело протекает пародонтит, при этом наблюдается обильное гнойное отделяемое из пародонтальных карманов. Кроме того, в данных случаях пародонтит плохо поддается лечению обычными лекарственными средствами, а наз-начение специфической протистоцидной терапии быстро приводит к купированию воспалительного процесса.
В пародонтологической практике к назначению протистоцидных средств прибегают довольно часто, нередко вслепую, без лабораторного подтверждения инвазии простейшими. Поэтому своевременная лабораторная диагностика протоинвазии ротовой полости и обоснованное проведение протистоцидной терапии у больных пародонтитом приобретают актуальное значение.
К методам протозоологической диагностики инвазии рото-вых протистов относятся следующие: протозооскопия нативного препарата, протозооскопия окрашенного мазка и культуральное исследование.
1. ПРОТОЗООСКОПИЯ НАТИВНОГО ПРЕПАРАТА
Принцип метода: взятый экссудат из пародонтального кармана смывают в капле физиологического раствора на предметном стекле и просматривают под микроскопом.
Реактивы и оборудование:
- стерильная корневая игла с турундой;
- предметное и покровное стекла;
- физиологический раствор или раствор Рингера-Локка;
- микроскоп.
Забор материала производят из пародонтальных карманов. Стерильную корневую иглу с турундой вводят в пародонтальный карман и поворачивают вокруг своей оси, затем переносят в каплю физиологического раствора, помещенную на предметном стекле, смывают в ней содержимое с иглы, покрывают покровным стеклом и микроскопируют при об. 40, ок. 7.
Физиологический раствор должен быть теплым, поскольку двигательная активность трихомонад в холодном растворе сни-жается или прекращается вообще, что может привести к отри-цательному результату. Для этого применяют специальные наг-ревательные столики. Мы в этих целях используем в качестве источника света небольшую бытовую лампу, для чего вынимаем зеркало-отражатель в микроскопе и вставляем лампу под кон-денсор. Инфракрасное излучение лампы нагревает предметное стекло с физиологическим раствором.
Entamoeba gangivalis в нативном препарате выявляются в 100% случаях. Они округлой формы, очень медленно передвигаются за счет выпячивания псевдоподий. Псевдоподии появляются с одного полюса либо сразу с нескольких в разном направлении. Они прозрачные, выступают в виде языков с закругленным кон-цом. Появление псевдоподии является главным отличительным признаком амеб от лейкоцитов, которые при воспалительном процессе в пародонте порой занимают все поле зрения. При невнимательном, беглом просмотре поля зрения за амебы можно принять разрушенные лейкоциты, которые теряют четкую круглую форму и ядро выходит за пределы оболочки. Если псевдоподии прозрачные, то центр амеб мутный, можно увидеть фагоцитированные ядра лейкоцитов. Размеры их вариабельны-: с лейкоцит и даже меньше, крупнее лейкоцита, иногда достига-ют гигантских размеров.
Trichomonas tenax в нативном препарате нами выявляются в 35,4% из всех положительных находок. Они имеют несколько вытяну-тую форму, похожи на плод груши. Отличительной чертой их от других клеточных элементов содержимого пародонтальных кар-манов является выраженная двигательная активность. Движение трихомонад энергичное, "порхающее", сопровождается выбрасы-ванием жгутиков на одном из полюсов. Во время движения те-ло простейших сокращается и они то вытягиваются по оси, то округляются. Двигательная активность их настолько энергична, что они могут быстро покидать поле зрения. В тех случаях, когда нативный препарат приготавливают в большом количестве физиологического раствора, капля получается толстой и три-хомонады быстро "уходят" в глубину капли, что может привес-ти к отрицательным результатам. Количество особей в препа-рате незначительное, от 1 до 2-3, поэтому нативный препарат следует просматривать тщательно.
При выраженном воспалительном процессе в пародонте с плазма всегда базофильно окрашена, цвет колеблется от нежно-голубого до насыщенно-синего. Она разделена на ин-тенсивно окрашенную с вакуолями и включениями эндоплазму и более просветленную гомогенную эктоплазму в виде узкой полоски по периферии, где никаких включений и вакуолей не обнаруживается. За счет эектоплазмы образуются выросты или псевдоподии. В эндоплазме есть вакуоли, фагоцитированные лейкоциты и бактерии, очень редко эритроциты. Размеры амеб разные. Около 40% экземпляров крупные, превышают лейкоциты.
В мазке, окрашенном метиленовым синим, четко просматривается оболочка амеб, ядро темно-синего цвета, цитоплаз-ма светло-синяя, вакуоли бесцветные.
Характер экссудата влияет на количество амеб. При гной-ном экссудате их число возрастает более чем в 2 раза по сравнению с серозным,
Результаты, полученные нами, показали, что 63,9% осо-бей фагоцитируют лейкоциты. В среднем на одну амебу при се-розном экссудате приходится по 1,8 фагоцитированному лейко-циту, при гнойном экссудате интенсивность поглощения лейко-цитов возрастает до 2,42. Ядра фагоцитированных лейкоцитов окрашиваются в интенсивный фиолетовый цвет. Эритрофагия и бактериофагия встречаются значительно реже.
У 72,58% особей мы обнаруживали псевдоподии. С увели-чением размеров амеб увеличивается частота обнаружения псевдоподий. Аналогичная ситуация наблюдалась и с вакуоля-ми в цитоплазме. Характер экссудата существенно влияет на качественные изменения в структуре простейших: при гнойном экссудате псевдоподии более выражены, иногда их много, ва-куоли крупнее.
Выявляемость амеб в мазке и отпечатке одинакова и составляет 98,13%. В отпечатке протисты скапливаются сразу по несколько экземпляров в поле зрения. Так как отпечаток занимает небольшую площадь на предметном стекле, то этот способ приготовления препарата имеет преимущества перед мазком, особенно в тех случаях, когда количество простейших невелико. Однако фон препарата, состоящий из большого скоп-ления лейкоцитов, эпителиальных клеток и обильной микрофло-ры, не позволяет детально изучать их морфологию. Этот не-достаток отсутствует в мазке, но при этом приходится прос-матривать большую площадь мазка.
Trichomonas tenax в окрашенном препарате имеют свою специфичес-кую структуру. В 62,82% они округлой формы, несколько реже грушевидной, веретенообразной или в виде усеченной пирамиды. На одном из полюсов имеется ядро, расположенное эксцентрич-но. Ядро имеет вид косточки сливы, удлиненное у 56,4% эк-земпляров, округлое у 37-42% простейших. Очень редко оно точечное, каплевидное.
По Романовскому-Гимза ядро окрашивается оксифильно, бледно. Цитоплазма окрашена базофильно, слабо, имеет сет-чатую структуру, иногда гомогенная. У единичных особей в цитоплазме встречаются фагоцитированные бактерии. Поглоще-ния лейкоцитов трихомонадами мы не наблюдали.
Несмотря на высказывания некоторых авторов об окраши-вании жгутиков и аксостиля краской Романовского, мы не встретили ни одного экземпляра трихомонад, у которых эти органы прокрашивались.
При окраске метиленовым синим ядро трихомонад интенсив-но окрашено в синий цвет, протоплазма нежная, сетчатая, свет-ло-синяя, вакуоли бесцветные.
Как и десневые амебы трихомонады имеют вариабельные размеры. Около 40% экземпляров приближаются к размерам лейкоцитов в препарате, остальные либо значительно мень-ше лейкоцитов, либо несколько превышают их.
Из всех выявленных случаев трихомонадной инвазии в отпечатке протистов обнаруживали в 50,77%, в мазке - 89,23%, Так как количество простейших этого вида в препарате состав-ляет от 1-3 до 15-20, то при их небольшом числе обильный фон в отпечатке не позволяет четко дифференцировать протис-тов. В мазке же все клеточные элементы разрознены, обособ-лены друг от друга, поле зрения хорошо просматривается, поэ-тому даже единичные экземпляры легко идентифицируются. Но для этого необходимо просматривать весь препарат, их поиск представляет определенные трудности.
3. КУЛЬТУРАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
П ринцип метода: содержимое пародонтальных карманов засевают в питательную среду и после инкубации микроскопируют раздавленную каплю.
- пробирки;
- капилляр или пипетка;
Страницы: 1, 2
